Содержание

• Преимущества автоматизации ИФА;
• Вместимость станции Biomek i5 и автоматизация протокола ИФА;
• Точный контроль переноса жидкостей избавляет от необходимости иметь планшетный вошер;
• Высокая воспроизводимость результатов ИФА на станции Biomek i5.

Иммуноферментный анализ (ИФА) – широко используемый аналитический метод детекции белковых или других молекул. В целом протокол ИФА достаточно консервативен (Рис. 1) и состоит из многочисленных этапов промывки и дозирования реагентов, что делает его трудоемким. Автоматизация этих этапов может не только сократить трудозатраты, но и обеспечить получение более воспроизводимых результатов. В данной статье мы описали систему автоматизации ИФА IL‑22 (R&D Systems) на роботизированной лабораторной станции Biomek i5 (Рис. 2A).

Рис. 1. Протокол иммуноферментного анализа IL-22

Рабочая платформа станции Biomek i5 позволяет не только разместить достаточное количество наконечников (Рис. 2B), но и интегрировать другие устройства, необходимые для проведения ИФА: шейкеры, планшетные вошеры и ридеры.

Для построения калибровочной кривой мы подготовили с помощью станции Biomek i5 серию разведений стандарта IL-22 в лунках планшета в трех повторностях. Инкубирование проводили в установленном на борту орбитальном шейкере. Точный контроль переноса жидкостей позволил нам полностью удалить все образцы, реагенты и буферы из лунок без использования вошера.

Чтобы гарантировать отсутствие значительных остатков жидкости, после аспирации из каждой лунки 300 мкл жидкости была произведена дополнительная аспирация небольшого дополнительного объёма в 4 точках по краю плоскодонных лунок. Эта процедура соответствовала этапу ручного протокола, в ходе которого планшет переворачивают на впитывающую салфетку для удаления остатков жидкости.

Рис. 2. (A) Внешний вид роботизированной лабораторной стнации Biomek i5 (Span-8). (B) Один из возможных вариантов подготовки рабочей платформы для проведения ИФА.

Таблица ниже демонстрирует воспроизводимость значений коэффициентов поглощения в трех повторностях. Все коэффициенты вариации (CV) не превышают 5%. Такая хорошая сходимость результатов говорит о высокой точности дозирования роботизированной лабораторной станции Biomek i5.

На Рис. 3 приведена итоговая калибровочная кривая. Линейность 0,991 свидетельствует о высокой точности серийного разведения.

Рис. 3. Стандартная кривая, полученная в ходе ИФА, автоматизированного на станции Biomek i5

Полученные данные отражают воспроизводимость, которой можно добиться за счет автоматизации ИФА на станции Biomek i5 (Span-8). В данном случае калибровочную кривую построили по результатам анализа 24 образцов. Целиком 96-луночный планшет можно обработать за 6,5 ч, при том, что стадии инкубации занимают в общей сложности 4,5 ч.

Чтобы добиться более высокой производительности, необходимой, например, при скрининге клонов, экспрессирующих антитела, можно проводить инкубацию вне станции или использовать многоканальный дозирующий модуль, позволяющий дозировать до 1 мл каждым из 96 каналов. Функция мультидозирования позволяет значительно ускорить работу с несколькими планшетами.

Большей автономности анализа можно добиться, интегрировав дополнительные хранилища планшетов и расходных материалов, а также планшетного ридера. Таким образом, можно свести к минимуму вероятность ошибки и время, которое пользователь тратит на раскапывание.

Роботизированные лабораторные станции Biomek не предназначены и не валидированы для диагностики заболеваний или других состояний. Данные, представленные в настоящем документе, были получены в процессе разработки.